5-8轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細(xì)胞系
5-8轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細(xì)胞系核心產(chǎn)品為構(gòu)建成功的穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株,可提供不同基因修飾類型(基因過表達(dá)、基因敲除、基因干擾)的細(xì)胞系,配套提供細(xì)胞培養(yǎng)說明書、細(xì)胞凍存液、復(fù)蘇液及質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告(含細(xì)胞純度、基因修飾效率、支原體檢測(cè)等),同時(shí)提供細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)支持及定制化基因修飾服務(wù)。該細(xì)胞系以人鼻咽癌細(xì)胞5-8F為親本細(xì)胞,采用成熟的基因編輯技術(shù)構(gòu)建,常用構(gòu)建方法包括慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染、CRISPR-Cas9基因敲除等,經(jīng)多輪篩選(如嘌呤霉素篩選)、Western Blot、Real-time PCR等驗(yàn)證,確?;蛐揎椥蔬_(dá)標(biāo)(基因敲除細(xì)胞系目標(biāo)基因不表達(dá),基因干擾/過表達(dá)細(xì)胞系目標(biāo)基因表達(dá)水平顯著改變),細(xì)胞純度≥98%,無支原體、細(xì)菌、真菌污染。細(xì)胞系適配常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)條件,可穩(wěn)定傳代20代以上,生物學(xué)特性穩(wěn)定,廣泛應(yīng)用于鼻咽癌相關(guān)基因(如VAMP8、nestin、ET-1、S100A8等)的功能研究、腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移機(jī)制研究、基因靶向藥物篩選及藥效評(píng)估等科研場(chǎng)景,為腫瘤學(xué)、分子生物學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的科研探索、藥物研發(fā)提供核心細(xì)胞模型,適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實(shí)驗(yàn)室及各級(jí)醫(yī)院腫瘤科科研部門。
構(gòu)建原理
該細(xì)胞系的構(gòu)建核心基于基因編輯技術(shù),結(jié)合5-8F鼻咽癌細(xì)胞的生物學(xué)特性,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇對(duì)應(yīng)的基因修飾策略,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的精準(zhǔn)調(diào)控,具體核心原理分為三種常見類型,適配不同科研需求:一是基因過表達(dá)構(gòu)建原理,將目標(biāo)基因片段克隆至慢病毒表達(dá)載體,與輔助質(zhì)粒(psPAX2、pMD2.G等)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收集病毒上清后感染5-8F細(xì)胞,通過抗性篩選(如嘌呤霉素)獲得穩(wěn)定過表達(dá)目標(biāo)基因的細(xì)胞株,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因在鼻咽癌細(xì)胞中的高表達(dá),用于研究基因的促癌或抑癌功能;二是基因敲除構(gòu)建原理,采用CRISPR-Cas9技術(shù),針對(duì)目標(biāo)基因功能區(qū)域設(shè)計(jì)特異性gRNA,構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染5-8F細(xì)胞,篩選陽性單克隆,通過Western Blot檢測(cè)驗(yàn)證目標(biāo)基因不表達(dá),成功獲得基因敲除細(xì)胞系,用于明確目標(biāo)基因在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的必需作用;三是基因干擾構(gòu)建原理,構(gòu)建靶向目標(biāo)基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染5-8F細(xì)胞后篩選穩(wěn)定細(xì)胞株,通過Western Blot和Real-time PCR檢測(cè)驗(yàn)證目標(biāo)基因表達(dá)水平顯著下調(diào),用于研究基因沉默后對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。此外,所有構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系均需經(jīng)過支原體、細(xì)菌等污染檢測(cè)及細(xì)胞活力、傳代能力驗(yàn)證,確保細(xì)胞系的穩(wěn)定性和可靠性,為后續(xù)科研實(shí)驗(yàn)提供優(yōu)質(zhì)細(xì)胞模型。
產(chǎn)品特點(diǎn)
該細(xì)胞系以“純度高、穩(wěn)定性好、特異性強(qiáng)、適配性廣"為核心,貼合鼻咽癌基因研究及藥物篩選的實(shí)際科研需求,核心特點(diǎn)突出,匹配科研實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞模型的核心訴求。一是基因修飾精準(zhǔn)高效,采用慢病毒轉(zhuǎn)染、CRISPR-Cas9等成熟基因編輯技術(shù),經(jīng)多輪驗(yàn)證確保基因修飾效率達(dá)標(biāo),可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的過表達(dá)、敲除或干擾,無脫靶效應(yīng),能精準(zhǔn)模擬鼻咽癌中基因異常表達(dá)的病理狀態(tài);二是細(xì)胞純度高、無污染,細(xì)胞純度≥98%,經(jīng)嚴(yán)格檢測(cè)無支原體、細(xì)菌、真菌污染,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,避免雜細(xì)胞及污染對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾;三是生物學(xué)特性穩(wěn)定,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,可穩(wěn)定傳代20代以上,傳代過程中基因修飾特性不丟失,細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為穩(wěn)定,符合科研實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)可重復(fù)性的核心要求;四是適配性強(qiáng),可適配體外常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)、MTT增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)、Western blotting檢測(cè)等多種實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景,同時(shí)可用于裸鼠異種移植體內(nèi)實(shí)驗(yàn),助力體內(nèi)外協(xié)同研究;五是操作便捷,提供完整的細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、凍存說明書,細(xì)胞復(fù)蘇成活率高(≥90%),無需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備,常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)條件即可滿足生長(zhǎng)需求,適配各類實(shí)驗(yàn)室操作;六是定制化服務(wù)*,可根據(jù)科研需求,定向構(gòu)建特定基因修飾的該細(xì)胞系,同時(shí)提供基因修飾效率驗(yàn)證、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)等配套服務(wù),滿足不同科研場(chǎng)景的個(gè)性化需求。
適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景
該細(xì)胞系專為鼻咽癌相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),適配多種體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景,核心應(yīng)用包括:一是鼻咽癌相關(guān)基因功能研究,如VAMP8、nestin、ET-1、S100A8等基因的敲除、干擾或過表達(dá)實(shí)驗(yàn),探究其在鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控中的作用機(jī)制,明確基因與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)關(guān)系;二是腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究,利用5-8F細(xì)胞本身的高轉(zhuǎn)移潛能,通過轉(zhuǎn)基因修飾,研究目標(biāo)基因?qū)Ρ茄拾┺D(zhuǎn)移能力的調(diào)控作用,探索腫瘤轉(zhuǎn)移的分子路徑;三是靶向藥物篩選與藥效評(píng)估,將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系用于針對(duì)特定基因的靶向藥物篩選,通過MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)等,評(píng)估藥物對(duì)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞增殖、遷移的抑制效果,為鼻咽癌靶向藥物研發(fā)提供可靠的篩選模型;四是體內(nèi)致瘤性實(shí)驗(yàn),將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞接種于裸鼠背部皮下,觀察腫瘤生長(zhǎng)速度、重量,結(jié)合Ki-67免疫染色等方法,評(píng)估目標(biāo)基因?qū)Ρ茄拾w內(nèi)致瘤性的影響;五是分子機(jī)制驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),可用于Western blotting、Real-time PCR、熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證目標(biāo)基因相關(guān)信號(hào)通路(如NF-κB信號(hào)通路)的調(diào)控機(jī)制,為鼻咽癌發(fā)病機(jī)制研究提供分子層面的數(shù)據(jù)支撐。該細(xì)胞系適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實(shí)驗(yàn)室及各級(jí)醫(yī)院腫瘤科科研部門,助力鼻咽癌相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)的順利開展。
備注:(具體細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作方法請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書)
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
儲(chǔ)存方面,該細(xì)胞系凍存狀態(tài)下需置于-80℃超低溫冰箱或液氮中保存,有效期為12個(gè)月,凍存時(shí)需使用配套凍存液,避免細(xì)胞損傷;復(fù)蘇后需立即接種至培養(yǎng)瓶,置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),復(fù)蘇后24小時(shí)內(nèi)避免更換培養(yǎng)基,確保細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境;常規(guī)培養(yǎng)狀態(tài)下,細(xì)胞需置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中,使用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng),定期更換培養(yǎng)基(每2-3天一次),確保細(xì)胞正常生長(zhǎng)。注意事項(xiàng)包括:產(chǎn)品僅供科研使用,不用于臨床治療診斷;細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需快速解凍(37℃水浴1-2分鐘),避免反復(fù)凍融,解凍后及時(shí)接種,防止細(xì)胞活力下降;培養(yǎng)過程中需嚴(yán)格遵循無菌操作原則,禁止共用培養(yǎng)耗材,避免細(xì)胞污染;細(xì)胞傳代時(shí)需控制消化時(shí)間,避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷,傳代比例建議為1:3-1:5,確保細(xì)胞生長(zhǎng)密度適宜;檢測(cè)過程中(如Western blotting、Real-time PCR),需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范,確?;蛐揎椥蕶z測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確;過期細(xì)胞及污染細(xì)胞嚴(yán)禁使用,詳細(xì)安全信息請(qǐng)參照產(chǎn)品SDS文件;運(yùn)輸過程中需采用干冰運(yùn)輸,避免高溫、劇烈震蕩,確保細(xì)胞活力,運(yùn)輸后需及時(shí)復(fù)蘇或轉(zhuǎn)移至對(duì)應(yīng)儲(chǔ)存環(huán)境。
訂購信息
如需獲取產(chǎn)品詳細(xì)資料、批次質(zhì)檢報(bào)告或報(bào)價(jià)方案,歡迎聯(lián)系上海拜力生物科技有限公司獲取技術(shù)支持與商務(wù)服務(wù)。
以上信息僅供參考,具體請(qǐng)已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。